中信湘雅生殖與遺傳?？漆t院（以下簡稱“中信湘雅”）林戈課題組和深圳市真邁生物科技有限公司（以下簡稱“真邁生物”）聯合組成的研究團隊在預印本服務網站BioRxiv在線發表了題為Accurate CNV identification from only a few cells with low GC bias in a single-molecule sequencing platform的學術論文。

論文的擴展應用方向以可以實施用于PGT-A應用為目標進行設計和實施。文章的結果展示，GenoCare單分子測序儀的微量細胞檢測方案在檢測靈敏度和時間上優于傳統NGS（Next generation sequencing）檢測方法。

基于Genocare檢測平臺的PGT-A的檢測周期可由2-3天縮短至24小時內，同時可以降低由傳統WGA（Whole Genome Amplification）帶來的偏好（圖1）。為了驗證該體系的染色體異常檢測能力，該研究對6種帶有不同染色體微小結構變異的細胞系進行了檢測（其中最小的染色體結構異常為1.29M的一段染色體缺失），并將單分子測序系統的分析結果與二代測序平臺Illumina HiSeq X Ten的結果進行了一致性分析。研究結果表明，該檢測體系的分析結果與基于二代測序平臺的分析結果完全一致，對低至1.29M的染色體結構異?？蓽蚀_檢出（圖2）。

圖1 對比傳統WGA擴增方案 GC bias明顯降低

圖2? 基于GenoCare 1600與HiSeq X Ten的CNV測序結果對比

（染色體異常：46, XX, del(1p36.33-1p36.32) 1.29M）

在基于微量細胞為研究樣品的不同應用場景中，嵌合一直是困擾科研人員的一個重要因素。如在植入前胚胎中，染色體非整倍體嵌合情況較為常見。而不同類型和比例的嵌合對臨床結局有一定影響。因此，對于少量細胞的染色體非整倍體嵌合狀況進行準確檢測顯得尤為重要。根據國際植入前遺傳學診斷學會PGDIS（Preimplantation Genetic Diagnosis International Society）的建議，高于80%的異常嵌合建議按非整倍體處理，低于20%的異常嵌合建議按整倍體處理，介于20~80%之間的異常嵌合可作為臨床醫生的參考，根據具體情況來選擇處理方案。該研究團隊同時對該檢測體系的嵌合異常胚胎的檢出效力進行了評估，將正常細胞系gDNA與染色體異常細胞系gDNA按0%~100%的不同比例進行混合模擬不同的嵌合比率進行建庫測序檢測分析。結果表明，該檢測體系可對低至20%的異常嵌合成功檢出（圖3）。

圖3 基于GenoCare 1600的微量細胞系CNVs檢測結果

（染色體異常：46, XY, dup(2p25.3-2p16.2) 53.26M，20%嵌合）